NR ABAS
AU Barry,R.A.; McKinley,M.P.; Bendheim,P.E.; Lewis,G.K.; DeArmond,S.J.; Prusiner,S.B.
TI Antibodies to the scrapie protein decorate prion rods
QU Journal of Immunology 1985 Jul; 135(1): 603-13
PT journal article
AB Scrapie is a degenerative, transmissible neurologic disease of sheep and goats which occurs in the absence of any detectable host immune response. Antibodies to the scrapie agent have been produced after immunization of rabbits with either scrapie prions or the prion protein, PrP 27-30, purified from infected hamster brain. Immunoreactivity of the antisera was assessed by dot and Western immunoblots with purified prions and PrP 27-30. Antibodies raised against infectious prions were more immunoreactive with native than denatured preparations, whereas those raised against PrP 27-30 were more reactive with denatured prion preparations. As determined by second antibody-colloidal gold, both antisera were found to decorate scrapie prion rods in purified preparations. Antibodies to cellular filamentous proteins failed to react with PrP 27-30 or the scrapie prion rods; conversely, antibodies to PrP 27-30 did not exhibit immunoreactivity with cellular filamentous proteins. The monospecificity of the rabbit antiserum raised against PrP 27-30 was established by its reactivity after affinity purification. The purified antibodies reacted with PrP 27-30 on Western blots and with the prion rods. Considerable evidence indicates that the scrapie rods are aggregates of infectious prions; the findings presented here provide an immunologic demonstration that PrP 27-30 is a structural component of the prion rods.
IN
Ein Kaninchen wurde mit zunächst 80 µg gereinigten Prionen in vollständigem Freundschem Adjuvans und dann nach jeweils 3-4 Wochen noch zweimal mit 130 bzw. 70 µg nativen Prionen in unvollständigem Freundschem Adjuvans immunisiert. Entsprechend markierte das so produzierte Antiserum intakte Prionen besser als denaturiertes Prionprotein. Das zuvor mit gelelektrophoretisch gereinigtem und daher zumindest teilweise denaturiertem Prionprotein immunisierte Kaninchen produzierte ein Antiserum, welches denaturiertes Prionprotein besser als nicht denaturierte Präparationen markierte [CGM]. Während dieses erste Antiserum der Prusiner-Gruppe ausschließlich krankheitstypische, proteaseresistente Prionproteine in Western Blots und in fixierten Gehirnschnitten markiert zu haben scheint [CGM], zeigte das in diesem Artikel vorgestellte zweite Antiserum im dot blot auch eine minimale Reaktion mit Protein aus nicht infiziertem Hamsterhirn.
Sowohl das rohe als auch das über eine PrP27-30-Säule affinitätsgereinigte Antiserum markierten im Western Blot Prionproteinbanden mit scheinbaren Molekularmassen von 27-30, 23-26, 19-22, 15-16 kD.
Mit dem rohen und auch mit dem affinitätsgereinigten neuen Antiserum und Gold-gebundenen Antikörpern gegen KaninchenAntikörper ließen sich sowohl einzelne Prionfibrillen, als auch Prionfibrillenaggregate elektronenmikroskopisch erkennbar markieren
MH Animal; Antibodies, Viral/*analysis/isolation & purification; Antibody Specificity; Antigen-Antibody Reactions; Antigens, Viral/immunology; Brain Chemistry; Chromatography, Affinity; Hamsters; Microscopy, Electron; Prions/*immunology; Rabbits; Sheep; Support, Non-U.S. Gov't; Support, U.S. Gov't, P.H.S.; Viral Proteins/analysis/*immunology
SP englisch
PO USA
OR Prion-Krankheiten 1