NR ABNL
AU Bosque,P.J.; Prusiner,S.B.
TI Cultured cell sublines highly susceptible to prion infection
QU Journal of Virology 2000 May; 74(9): 4377-86
PT journal article
AB Cultured cell lines infected with prions produce an abnormal isoform of the prion protein (PrPsc). In order to derive cell lines producing sufficient quantities of PrPsc for most studies, it has been necessary to subclone infected cultures and select the subclones producing the largest amounts of PrPsc. Since postinfection cloning can introduce differences between infected and uninfected cell lines, we sought an approach to generate prion-infected cell lines that would avoid clonal artifacts. Using an improved cell blot technique, which permits sensitive and rapid comparison of PrPsc levels in multiple independent cell cultures, we discovered marked heterogeneity with regard to prion susceptibility in tumor cell sublines. We exploited this heterogeneity to derive sublines which are highly susceptible to prion infection and used these cells to generate prion-infected lines without further subcloning. These infected sublines can be compared to the cognate uninfected cultures without interference from cloning artifacts. We also used susceptible cell lines and our modified cell blot procedure to develop a sensitive and reproducible quantitative cell culture bioassay for prions. We found that the sublines were at least 100-fold more susceptible to strain RML prions than to strain ME7 prions. Comparisons between scrapie-susceptible and -resistant cell lines may reveal factors that modulate prion propagation.
IN
In den ersten 11 Tagen nach der Zugabe Scrapie-infektiösen Materials fanden die Autoren in Zellkulturen einer Neuroblastomzelllinie eine Abnahme der PrPsc-Menge bis an die Grenze der Nachweisbarkeit. Ab dem 15. Tag nahm die PrPsc-Menge in einigen Subklonen wieder zu. Es gab also innerhalb einer Neuroblastomzelllinie erhebliche Unterschiede zwischen den Zellen hinsichtlich der Vermehrung von PrPsc nach Zugabe von Scrapie-Infektiosität. Dieser Befund bestätigte sich auch bei einer Zelllinie aus einem Maushypothalamus.
Außerdem stellten die Autoren fest, dass bestimmte Subzelllinien mindestens 100-fach mehr PrPsc produzierten, wenn sie mit dem Erregerstamm RML statt des Stammes ME7 infiziert wurden.
Die meisten Zelllinien vermehren keine Prionen [AKFU,ACCQ]. Findet man eine Scrapie-Infektiosität amplifizierende Zelllinie, dann tun das offenbar jeweils nur wenige Zellen [AJUS,AJUR], die man subklonieren muß, um eine hochproduktive Subzelllinie zu erhalten [ACCQ,AJUR]. In solchen Subklonen produzieren dann 80-90% der Zellen Scrapie-Infektiosität [AJUR]
MH Animal; Biological Assay; Cell Line; Culture Media; Immunoblotting; Kinetics; PrPsc Proteins/biosynthesis; Prions/immunology/*physiology
AD Institute for Neurodegenerative Diseases, University of California, San Francisco, California 94143-0518, USA
SP englisch
PO USA