NR AJTA
AU Prusiner,S.B.; Groth,D.F.; Bildstein,C.; Masiarz,F.R.; McKinley,M.P.; Cochran,S.P.
TI Electrophoretic properties of the scrapie agent in agarose gels
QU Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 1980 May; 77(5): 2984-8
PT journal article
AB The molecular properties of the scrapie agent were investigated by subjecting partially purified preparations to electrophoresis on agarose gels. When electrophoresis was performed at room temperature in the presence of sodium dodecyl sulfate (NaDodSO4), most of the recoverable agent was found at the top of the gel, consistent with previous studies indicating aggregation of the agent upon exposure to elevated temperatures. In addition, less than 5% of the agent applied to the gel was found after electrophoresis, even though the study was performed with a low concentration of NaDodSO4 (0.1%). Further studies on the inactivation of the agent by NaDodSO4 suggest that this may be, in part, a function of the NaDodSO4: protein ratio in the sample. In contrast, sodium N-lauroyl sarcosinate (Sarkosyl) did not inactivate the agent in concentrations as high as 5% (wt/vol). Virtually all of the infectivity could be recovered after electrophoresis of the agent into 0.6% agarose gels at 4 degrees C in the presence of 0.2% Sarkosyl. Digestion of the preparations with micrococcal nuclease and proteinase K prior to Sarkosyl electrophoresis caused a substantial portion of the agent to migrate ahead of DNA fragments of 1 x 10(6) daltons. The behavior of the scrapie agent in electrophoretic gels is consistent with earlier studies showing that the monomeric form of the agent has a sedimentation coefficient of less than or equal to 40 S. Thus, the smallest or monomeric form of the agent is smaller than any known animal virus.
IN
Ein von Richard Marsh auf Hamster übertragener Scrapie-Erreger wurde durch intrazerebrale Inokulation von 50 µl Hirnhomogenat (rund 10 Millionen ID50-Einheiten) Scrapie-kranker Hamster auf junge, weibliche syrische Goldhamster übertragen. Die Empfängerhamster wurden schon nach 55-65 Tagen getötet, um daraus die Scrapie-Infektiosität zu isolieren.
Bei Raumtemperatur aggregiert das Scrapie Agens so stark, dass nur wenige Prozent der Infektiosität in ein Gel eindringen können. 0,1% SDS verhindern nicht die Aggregation, inaktivieren aber unter diesen Bedingungen den größten Teil der Infektiosität. Dagegen wird diese durch 5% Sarkosyl nicht reduziert. Die Infektiosität wird nicht reduziert, wenn das vorgereinigte Agens 16 Stunden bei 4° mit Micrococcus-Nuklease und anschließend 8 Stunden bei 4° in 0,2% Sarkosyl mit Proteinase K inkubiert wird. Wenn das Scrapie-Agens vor der Elektrophorese mit Micrococcus-Nuklease und Proteinase K behandelt wurde, läuft ein erheblicher Teil der Infektiosität vor DNA mit einem Molekulargewicht von 1 Million Dalton. Hier handelt es sich vermutlich um die Monomere des infektiösen Prinzips, welches demnach wesentlich kleiner als jeder bekannte Virus ist. Die Infektiosität bleibt bis zu einem Verhältnis von 800 mg SDS pro g Protein unverändert. Bei einem SDS/Protein-Verhältnis von 1,8 werden 90% der Infektiosität innerhalb von 3 Stunden bei Raumtemperatur inaktiviert.
MH Detergents; Electrophoresis, Agar Gel/methods; Molecular Weight; Nucleic Acids/analysis; Prions/*analysis; Support, U.S. Gov't, Non-P.H.S.; Support, U.S. Gov't, P.H.S.; Viral Proteins/analysis; Virus Replication
AD Stanley B. Prusiner, Department of Neurology and Biochemistry and Biophysics, University of California, San Francisco 94143, California
SP englisch
PO USA
OR Prion-Krankheiten 6
ZF kritische Zusammenfassung von Roland Heynkes