NR ANYX
AU Paramithiotis,E.; Pinard,M.; Lawton,T.; LaBoissiere,S.; Leathers,V.L.; Zou,W.Q.; Estey,L.A.; Lamontagne,J.; Lehto,M.T.; Kondejewski,L.H.; Francoeur,G.P.; Papadopoulos,M.; Haghighat,A.; Spatz,S.J.; Head,M.; Will,R.; Ironside,J.; O'Rourke,K.I.; Tonelli,Q.; Ledebur,H.C.Jr.; Chakrabartty,A.; Cashman,N.R.
TI A prion protein epitope selective for the pathologically misfolded conformation
QU Nature Medicine 2003 Jul; 9(7): 893-9
KI Nat Med. 2003 Jul;9(7):819-20. PMID: 12835691
PT journal article
AB Conformational conversion of proteins in disease is likely to be accompanied by molecular surface exposure of previously sequestered amino-acid side chains. We found that induction of beta-sheet structures in recombinant prion proteins is associated with increased solvent accessibility of tyrosine. Antibodies directed against the prion protein repeat motif, tyrosine-tyrosine-arginine, recognize the pathological isoform of the prion protein but not the normal cellular isoform, as assessed by immunoprecipitation, plate capture immunoassay and flow cytometry. Antibody binding to the pathological epitope is saturable and specific, and can be created in vitro by partial denaturation of normal brain prion protein. Conformation-selective exposure of Tyr-Tyr-Arg provides a probe for the distribution and structure of pathologically misfolded prion protein, and may lead to new diagnostics and therapeutics for prion diseases.
IN In saurer Lösung nimmt bei rekombinantem (gentechnisch hergestelltem) Prionprotein der Anteil der ß-Faltblattstrukturen zu, die Proteine aggregieren stärker und man findet mehr Tyrosin auf der Proteinoberfläche. Die meisten Tyrosinreste gibt es in strukturell stärker fixierten carboxyterminalen zwei Dritteln des Prionproteins, wo auch dreimal jeweils zwei Tyrosine direkt nebeneinander vorkommen. Gleich zweimal gibt es bei Mensch, Maus, Hamster, Schaf und Rind im Prionprotein die Sequenz YYR, also zwei Tyrosine gefolgte von einem Arginin. Deshalb immunisierten die Autoren ein Kaninchen und eine Ziege mit entsprechenden Peptiden und erhielten tatsächlich polyklonale Antiseren, welche spezifisch PrPsc und nicht PrPc erkannten. Anschließend erzeugten sie nach Immunisierung von BALB/c-Mäusen mit CYYRRYYRYY-Peptiden monoklonale Antikörper. Sie fanden 10, die nicht nur YYR-Peptide banden, sondern spezifisch PrPsc der Maus-adaptierten Scrapiestämme ME7 und 139A, des Hamster-adaptierten Scrapiestammes 263K sowie aus natürlich infizierten Schafen und Rindern isoliertes PrPsc. Einige der monoklonalen Antikörper banden PrPsc bestimmter Spezies besser als das PrPsc anderer Spezies. Mit ihren monoklonalen Antikörpern erhielten die Autoren positive Signale von zwei klassischen und drei varianten Fällen von CJK sowie von einem GSS-Hirnhomogenat, aber nicht von 12 Gehirnen aus Patienten mit anderen neurologischen Krankheiten.
MH Amino Acid Motifs; Amino Acid Sequence; Animal; Antibodies/genetics/immunology/metabolism; *Antibody Specificity; Cross Reactions; Enzyme-Linked Immunosorbent Assay; Epitopes/*immunology; Flow Cytometry; Human; Molecular Sequence Data; PrPsc Proteins/*chemistry/*immunology; Precipitin Tests; Protein Conformation; *Protein Folding; Rabbits; Sensitivity and Specificity; Sequence Homology, Amino Acid; Support, Non-U.S. Gov't; Tyrosine/chemistry/metabolism
AD Caprion Pharmaceuticals Inc., 7150 Alexander-Fleming, St-Laurent, Quebec H4S 2C8, Canada.
SP englisch
PO USA
ZF kritische Zusammenfassung von Roland Heynkes