NR ATCX
AU Huang,H.; Rendulich,J.; Stevenson,D.; O'Rourke,K.I.; Balachandran,A.V.
TI Evaluation of Western blotting methods using samples with or without sodium phosphotungstic acid precipitation for diagnosis of scrapie and chronic wasting disease
QU Canadian Journal of Veterinary Research 2005 Jul; 69(3): 193-9
PT evaluation studies; journal article
AB The purpose of this study was to enhance the sensitivity of the Western blot (WB) test for use as an alternative and confirmatory method for the diagnosis of scrapie and chronic wasting disease (CWD) in Canada by comparing 2 sample preparation procedures: an abnormal prion protein (PrPsc) concentration procedure using sodium phosphotungstic acid (PTA) precipitation and a procedure using crude sample without precipitation. A total of 100 cerebrum samples (52 sheep and 48 elk), including 66 negative (31 sheep, 35 elk) and 34 positive (21 scrapie and 13 CWD positive) samples diagnosed by using immunohistochemistry (IHC) on retropharyngeal lymph node (RPLN) and medulla oblongata at obex, were tested by using WB with the 2 sample preparation procedures. The WB using non-PTA enriched sample (crude extract) detected, on average, only 71.7% (9 of 15, 60.0% for scrapie, 5 of 6, 83.3% for CWD) of the samples that tested positive by using WB with PTA enriched samples. No case was positive by WB using crude extract but negative by WB using PTA enriched sample. No false positive was found. Serial dilution of PTA precipitated samples demonstrated that the technique increases the detection limit approximately 100 fold. Additionally, the comparison of the WB and IHC on cerebrum from all the positive cases demonstrated that WB following PTA precipitation and IHC had 100% agreement by detecting 6 positive for CWD on cerebrum; while IHC detected scrapie in only 14 out of 15 positive cerebrum samples by using WB following PTA precipitation. Phosphotungstic acid precipitation is therefore a useful adjunct to WB analysis of scrapie and CWD and tissues.
IN
Die Autoren verglichen den Western blot mit vorheriger Phosphorwolframsäure-Fällung (PWSF) mit einem Western blot (WB) ohne vorherige Konzentrationsprozedur (also weniger sensitiv als der OIE-Western blot) und Imunhistochemie anhand von 100 kanadischen Hirnproben, die zuvor mittels Imunhistochemie in retropharyngealen Lymphknoten (Nodus lymphaticus retropharyngeus) und Obex als Scrapie- oder CWD-positiv oder negativ diagnostiziert worden waren. Sie hatten 66 negative (31 Schafe, 35 Hirsche) und 34 positive (21 Scrapie- und 13 CWD-Fälle) Proben. Benutzen für ihre Experimente mit dem Western blot konnten sie aber nur Gewebeproben aus dem Großhirn (Cerebrum). Sie fanden:
Krankheit Scrapie-Fälle CWD-Fälle
Probenentnahme RPLK Obex Cerebrum RPLK Obex Cerebrum
Immunhistochemie 21 20 14 13 13 6
PWSF + WB 15 6
WB 9 5
Diese Ergebnisse zeigen zwar einen deutlichen Vorteil der Phosphorwolframsäure-Fällung, aber es fällt auch ein sonst nicht üblicher Vorteil der Immunhistochemie auf, der darauf zurückzuführen ist, dass die Autoren nicht die beim OIE-Western blot übliche Ultrazentrifugation zur Probenkonzentration verwendeten. So wurde zwar die Empfindlichkeit des Western blots bei den Autoren laut Verdünnungsreihen um zwei Größenordnungen gesteigert, aber dieses Ergebnis lässt sich nicht auf Labors übertragen, in denen der Western blot durch Ultrazentrifugation mindestens ebenso empfindlich wie die Immunhistochemie ist.
MH Animals; Animals, Wild; Blotting, Western/methods/*veterinary; Canada; Comparative Study; *Deer; Immunohistochemistry/veterinary; Phosphotungstic Acid/*diagnostic use; PrPsc Proteins/analysis; Precipitation; Prions/analysis; Scrapie/*diagnosis; Sensitivity and Specificity; Sheep; Wasting Disease, Chronic/*diagnosis
AD Ottawa Laboratory Fallowfield, Animal Diseases Research Institute, Canadian Food Inspection Agency, 3851 Fallowfield Road, Ottawa, Ontario. huangho@inspection.gc.ca
SP englisch
PO Kanada